| Resumo: | Detecção de possíveis mutações do gene ERG11 no patógeno emergente Trichosporon asahii
Ana Paula Martins, Laura de Oliveira Dias, Silas Henrique Ferreira da Cruz, Ana Carolina Barbosa Padovan
Universidade Federal de Alfenas, Instituto de Ciências Biomédicas/Departamento de Microbiologia e Imunologia, Curso: Farmácia.
E-mail: apmartinsunifal@gmail.com
Resumo: Infecções invasivas por Trichosporon spp. têm aumentado consideravelmente nos últimos anos, principalmente em pacientes neutropênicos e com uso de cateteres, com mortalidade de até 80%. A principal espécie isolada de todos os tipos de infecções é Trichosporon asahii. Esta apresenta sensibilidade limitada a diferentes antifúngicos, sendo a classe dos triazólicos, a primeira linha de escolha para o tratamento de infecções. Embora não exista padronização de pontos de corte epidemiológicos para determinar sensibilidade/resistência, é cada vez mais frequente o isolamento de cepas de T. asahii que apresentam Concentrações Inibitórias Mínimas (CIMs) elevadas para fluconazol e itraconazol. No geral, são conhecidos três mecanismos de resistência em leveduras como: mutação no gene ERG11, codificador da enzima alvo dos antifúngicos triazólicos, a expressão de bombas de efluxo de drogas e alta expressão gênica do gene alvo. Porém, ainda são desconhecidos tais mecanismos em Trichosporon spp. Assim sendo, este trabalho tem como objetivo principal determinar a existência de isolados clínicos de T. asahii resistentes aos triazólicos e avaliar a relação com possíveis mutações no gene ERG11. Para isso, foram realizados testes de susceptibilidade aos antifúngicos fluconazol (FLC), itraconazol (ITR), voriconazol (VRC) e posaconazol (PSC) em 100 isolados clínicos de T. asahii, utilizando protocolo do CLSI[1] (Clinical and Laboratory Standards Institute). As CIMs foram determinadas em leituras de 24 e 48 horas de incubação. Todos os isolados que apresentaram CIMs com valores de 2 logs acima da mediana foram classificados como resistentes[2]. A partir de sequências de ERG11 depositadas no GenBank, foi realizada análise de DNA e proteica no programa SeaView. Utilizado o tempo de 48h como padrão ouro de leitura, foram determinados como pontos de corte epidemiológicos os valores de 8μg/ml, 0,5μg/ml, 1μg/ml, e 0,125μg/ml para FLC, ITR, PSC e VRC respectivamente. Dos 100 isolados testados, foram encontrados 7 com CIMs elevadas além do ponto de corte estabelecidos, sendo 2 provenientes de amostras de sangue e 5 de urina. Dois exibiram resistência a FLC e VRC, 1 somente a FLC, 3 a ITR e 1 somente a PSC. Na leitura de 24h, somente 1 isolado resistente foi detectado. Em relação às 3 sequências de ERG11 depositadas no GenBank, foram verificadas diversas mutações sinônimas e não-sinônimas entre o isolado sabidamente resistente a FLC e 1 dos 2 isolados referência sensíveis. Contudo, na posição 1072 da sequência de nucleotídeos do isolado resistente, houve troca de T-C, mudando o aminoácido cisteina para arginina em relação aos 2 isolados sensíveis. Essas posições serão investigadas em sequenciamento nos 7 isolados clínicos classificados como resistentes pelo presente trabalho. Conclui-se que a leitura em 48 horas dos testes de susceptibilidade foi a ideal para T. asahii, sendo possível aplicar pontos de corte epidemiológicos para determinar que 7% dos isolados são resistentes aos triazólicos, principalmente aqueles de urina, podendo exibir como mecanismos de resistência mutações no gene alvo ERG11.
Financiamento: CNPq
Referências:
[1] Clinical and Laboratory Standards Institute. M27-A3. 2008. 28:1-33.
[2] Cantón E, Pemán J, Iñiguez C, Hervás D, Lopez-Hontangas JL, Pina-Vaz C, et al. 2013. Epidemiological cutoff values for fluconazole, itraconazole, posaconazole, and voriconazole for six Candida species as determined by the colorimetric Sensititre YeastOne method. J Clin Microbiol. 51:2691-2695. |