| Resumo: | AVALIAÇÃO DA METABOLIZAÇÃO DE MTT POR ESPLENÓCITOS DE CAMUNDONGOS ESTIMULADOS POR ANTÍGENOS TOTAIS DE Escherichia coli
Granço, M.¹, Carradori, R.G.¹, Santos,L.A.²,Coelho, L.F. ³, Malaquias, L.C.C.³
1 – Discentes do Curso de Biomedicina/UNIFAL-MG
2- Discente do programa de pós-graduação de Biociências aplicada à saúde (PPGB)/UNIFAL-MG
3 - Docentes do Departamento de Microbiologia e Imunologia/UNIFAL-MG
Marília.granco@gmail.com
Resumo: A microbiota intestinal, anteriormente chamada de flora intestinal, é constituída por um grupo diverso de bactérias (Escherichia, Aerobacter, Salmonela, Lactobacillus entre outras) que vivem no intestino e auxiliam em vários processos fisiológicos, como na digestão de alimentos. Também promovem um efeito barreira no desenvolvimento de microrganismos patogênicos, além de ter papel importante na manutenção da homeostase imunológica intestinal. O objetivo deste estudo foi avaliar, por meio da metabolização de MTT (um sal de tetrazólio utilizado como método colorimétrico rápido para medir proliferação celular e citotoxicidade), a resposta de proliferação de esplenócitos de camundongos estimulados por antígenos totais de Escherichia coli, bactéria gram negativa, residente na microbiota intestinal e que apresenta um importante papel na manutenção da fisiologia do intestino. Os animais utilizados nesse projeto foram camundongos da linhagem Swiss “outbread”, obtidos do Biotério da Universidade Federal de Alfenas (UNIFAL-MG). Para obtenção de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) foram coletados 10 mL de sangue periférico humano heparinizado. O ensaio de proliferação e viabilidade celular foi avaliado pela técnica do MTT. A técnica de MTT tem por finalidade quantificar espectrofotometricamente a ativação e o crescimento celular. Esta técnica baseia-se na clivagem do sal amarelo tetrazólio (MTT) em cristais de formazan azul. Foram testadas diferentes concentrações de antígenos totais de E. coli, diferentes números de células e diferentes tempos de cultura, para obtenção do melhor índice de proliferação celular. Não foi obtido resposta de proliferação de esplenócitos de camundongos induzida pelos antígenos totais de E. coli por LPS. De forma diferente foi observada resposta de proliferação de PBMC no terceiro dia de cultura. Sugere-se que houve uma resposta celular induzida pelo LPS nas diferentes concentrações testadas. Tal fato sugere também que o LPS presente no antígeno pode estar influenciando na resposta imune celular. No ensaio de proliferação celular pelo MTT observou-se que houve proliferação celular em diferentes concentrações do antígeno e a viabilidade não foi inferior a 70%. Financiamento: PIBITI/CNPq |