| Resumo: | A β2-Glicoproteina I (β2GPI) é uma proteína produzida principalmente pelo fígado e encontrada em vários líquidos biológicos, comportando-se no plasma como uma proteína de fase aguda da inflamação. Suas funções ainda não são bem esclarecidas, mas a β2GPI participa na regulação de diversos processos fisiopatológicos e tem sido sugerida como uma proteína imunomoduladora in vivo. Sua participação na resposta de fagócitos, durante o processamento de antígenos, tem sido investigada. A pesquisa dos efeitos da β2GPI sobre a fagocitose e destruição de Candida albicans por células THP-1 é o objetivo do nosso trabalho, que está em andamento. As células THP-1 compõem uma linhagem celular promonocítica humana, derivada da Leucemia Monocítica Aguda, que sob condições apropriadas podem ser induzidas a diferenciação terminal em macrófagos por vários compostos, como o PMA. A obtenção da β2GPI humana e a expansão das células THP-1 foram realizadas nesta etapa do trabalho, para posterior aplicação nos ensaios de fagocitose de C. Albicans. A β2GPI foi purificada a partir da precipitação de plasma humano em ácido perclórico, seguida por cromatografia de afinidade do sobrenadante em coluna de Sepharose Heparina (Heparin Sepharose 6 Fast Flow, GE Healthcare). A análise da pureza e da estabilidade do lote de proteína purificado foram feitas através de eletroforese em gel SDS-PAGE e ensaio ELISA com anticorpo monoclonal anti-β2GPI humana. O rendimento da purificação foi de 6,7mg de β2GPI monomérica e 3,0mg de β2GPI dimérica. A fração do lote que contém a β2GPI dimérica mostrou melhor reatividade no ensaio ELISA. As células THP-1 foram descongeladas, cultivadas em meio de cultura RPMI-1640 suplementado com SFB 10% e antibióticos (estreptomicina/penicilina), sob uma atmosfera de 5% de CO2 em estufa própria para cultura de células. As trocas do meio de cultura para manutenção da expansão celular foram de 4 em 4 dias. As células mantiveram-se sobrenadantes e arredondadas, com as bordas bem definidas. A proliferação foi constante, porém lenta. Concluímos, nesta etapa do trabalho, que: (a) nos ensaios de fagocitose poderemos estudar os efeitos da β2GPI nativa monomérica e da β2GPI que possui a forma dimerizada de melhor reatividade com o anticorpo monoclonal anti-β2GPI. As condições de cultivo das células THP-1 devem ser adaptadas para a melhoria da proliferação celular. (Aprovado no Comitê de Ética em pesquisa - CAAE 45050815.0.0000.5142). |