| Resumo: | Células natual killer são linfócitos citotóxicos do sistema imune inato que agem na primeira linha de defesa imunológica, combatendo células infectadas ou células tumorais. Em muitos mamíferos, inlcusive os murinos, durante o início da gestação, nota-se que estes linfócitos migram para o útero, se proliferam e se diferenciam, formando uma subpopulação de células NK com ausência de citotoxidade que atuam na tolerância materna-fetal, além de produzirem fatores angiogênicos responsáveis pela remodelação vascular materna garantindo a nutrição do embrião. A essa subpopulação é dado o nome de células natural killer uterinas (uNK). A ciclofosfamida é um quimioterápico antineoplásico usado clinicamente para tratar vários tipos de canceres, doenças autoimunes e em terapia imunossupressiva após transplantes de órgãos. Sabe-se que a ciclofosfamida apresenta efeito teratogênico e seu uso pode causar redução na viabilidade gestacional. Este trabalho buscou analisar possíveis efeitos da ciclofosfamida nas células uNK de camundongos durante o período pré- implantacional, alterações morfológicas no útero, incidência dos subtipos de células uNK, além de observar interferência da droga na implantação dos embriões e na viabilidade gestacional. Foram utilizadas 20 fêmeas de camundongo da linhagem Swiss, estas foram colocadas para acasalar com machos da mesma linhagem. Nelas foi injetado 40mg/kg de ciclofosfamida intraperitonialmente no 1° dia de gestação (ddg), 10 fêmeas foram sacrificadas no 10° ddg para a coleta dos sítios de implantação e contagem dos corpos lúteos a fim de analisar a taxa de implantação, as outras 10 levaram a gestação até o nascimento para a análise da prole. A análise morfológica das células uNK foi feita por meio de citoquímica para lectina DBA que é capaz de identificar glicoconuugados contendo N-Acetil-D-galactosamine (NacGal) expressos na membrana plasmática e granulos das uNK . Os dados foram analisados estatisticamente por meio de teste t (p≤0,05) utilizando o programa PRISM 5.01. A ciclofosfamida administrada no 1º ddg diminuiu a expressão de NacGal nos grânulos e superfície das uNK permitindo a observação de grande número de células fracamente reativas à lectina DBA (DBAlowuNK). Esse foi semelhante a outros estudos de nosso laboratório nos quais a ciclofosfamida foi injetada no período médio de gestação (8º e 10º dias) [1]. No entanto, nestes estudos prévios a ciclofosfamida causou 100% de perda fetal, inviabilizando totalmente a gestação. Em nossos estudos foi observado um maior número total de células uNK em regiões mais próximas ao embrião após tratamento com ciclofosfamida. As DBAlowuNK eram maiores em número em regiões mais distantes, mas esse número era ainda maior em regiões próximas ao embrião implantado. Apesar do efeito evidente na expressão de NacGal pelas uNK, a ciclofosfamida injetada no 1°ddg não inviabilizou a implantação embrionária (taxa de implantação = 100% no grupo tratado e controle) como quando injetada na gestação média. Em nossos estudos, os sítios de implantação de animais tratados tinham aspecto normal. Os grupos controle e tratado apresentaram números de sítios de implantação normais (13,4 ± 1,81 e 13,2 ± 0,83). O número (7,7±5,63) e peso (2,012g±0,244) dos filhotes de animais tratados com ciclofosfamida eram estatisticamente iguais aos do controle (8,8± 2,8 e 1,826g±0,092). Portanto, a dose de 40mg/kg de ciclofosfamida administrada no 1°ddg aumentou o número de células uNK e provocou grande ocorrência de células DBAlow uNK. No entanto, essa droga injetada no período pré-implantacional não foi capaz de impedir a implantação dos embriões nem de inviabilizar a gestação ou parto. Esses resultados em conjunto sugerem que as células uNK têm um papel na proteção contra agressão da ciclofosfamida a exemplo de seu papel na proteção durante a inflamação causada por Lipopolissararídeo de e-coli (LPS) diagnosticada em outros estudos em nosso laboratório [2].
Financiamento: Fundação de Apoio à Pesquisa de Minas Gerais – FAPEMIG
Referências:
[1] Horvat, R. O. Responsividade das Células Natural Killer Uterinas DBA+ e alterações comportamentais frente ao Tratamento com Ciclofosfamida. 2015. Dissertação (Mestrado em Biociências Aplicadas à Saúde). ICB. UNIFAL-MG, Alfenas. MG.
[2] Zavan B, De Almeida EM, Salles Éda S, do Amarante-Paffaro AM, Paffaro VA Jr. COX-2 plays a role in angiogenic DBA(+) uNK cell subsets activation and pregnancy protection in LPS-exposed mice. Placenta. Epub 2016 Jun 11. |